化學(xué)品毒物快速檢測方法：骨髓細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)！

　　骨髓細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)，是短期致突變實(shí)驗(yàn)方法之一，其目的是用來檢測化學(xué)物是否具有致突變作用；是用于染色體損傷和干擾細(xì)胞有絲分裂的化學(xué)毒物的快速檢測方法。

　　由于微核是骨髓細(xì)胞染色體斷裂后產(chǎn)生，所以骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)可用來檢測化學(xué)物是否具有致突變作用。百檢檢測具有GBZ/T 240.11-2011化學(xué)品毒理學(xué)評價(jià)程序和試驗(yàn)方法第11部分：體內(nèi)哺乳動物骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)的相關(guān)檢測資質(zhì)，能夠出具專業(yè)的第三方檢測報(bào)告。具體實(shí)驗(yàn)方法和步驟如下：

　　試驗(yàn)方法及步驟：

　?。ㄒ唬?shí)驗(yàn)動物的處理：

　　1、一般不用大鼠而用小鼠，體重在20-24克，雌雄均可。每組動物10只可設(shè)3-4個(gè)劑量組，同時(shí)設(shè)陰性對照組和陽性對照組。

　　2、染毒推途徑依受試物定，選擇與人時(shí)間接觸方式相似，本實(shí)驗(yàn)選取腹腔注射。

　　3、染毒劑量以LD50的1/5-1/50為好，給藥采取24小時(shí)本實(shí)驗(yàn)采用昆明種小鼠設(shè)三個(gè)染毒組和陰性個(gè)對照組和一個(gè)陽性對照組，連續(xù)染毒4天（或24h二次染毒），于染毒后第5天（或第二次染毒后6h）脫頸椎處死動物。取胸骨（或股骨）。

　?。ǘ┪⒑朔治銎瑴?zhǔn)備：

迅速取胸骨及部分肋骨用刀片剔除肌肉組織及表面結(jié)締組織，沿胸骨

　　剪掉多余肋骨，用濾紙或紗布將胸骨擦凈。取載波片，標(biāo)記后，用滴管取小牛血清在載波片一端滴一滴小牛血清。剪去骨骺端，用彎止血鉗將骨髓擠至盛有一-滴小牛血清的玻片上，混勻，用推片將其推成薄厚均勻的片子、自然干燥。

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片膜干后用甲醇固定15min，晾干。

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干燥后用吸管吸取10%Giemsa染液滴滿載玻片，染色10-15min。染色完畢，自來水沖洗載波片背面，干后鏡檢。

　?。ㄎ澹┙Y(jié)果觀察與計(jì)算：

　　先于低倍鏡下選擇細(xì)胞分布均勻、染色均勻，細(xì)胞無損區(qū)域，再在油鏡下計(jì)算500個(gè)嗜多染細(xì)胞的微核率。

　　微核的辨認(rèn)：微核大多數(shù)呈圓形，單個(gè)的，邊緣光滑整齊，嗜色性與核--致，吉姆薩染色厚呈蘭紫色或灰蘭色，偶爾有橢圓形、腎形、馬蹄鐵形、環(huán)形。一個(gè)細(xì)胞中出現(xiàn)兩個(gè)或更多的微核，仍按一個(gè)計(jì)算。

　　微核出現(xiàn)率%=微核出現(xiàn)個(gè)數(shù)/細(xì)胞數(shù)X 100

　?。┙Y(jié)果評價(jià)

　　將各組微核率進(jìn)行X2檢驗(yàn)，判斷其影響程度，還可進(jìn)行劑量反應(yīng)關(guān)系評價(jià)。

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